图18.4 双向琼脂扩散试验 [NextPage]4.对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis) 若在双扩基础上加电泳，将抗原孔置负极端，抗体孔置正极端。由于抗原所带的负电荷较抗体多，且抗原分子小于抗体，在电场中能够克服电渗的作用而由负极泳向正极；抗体却克服不了电渗作用，从正极向负极移动，二者形成对流，并在比例适宜处形成白色沉淀线，称为对流电泳。因抗原抗体皆作定向运动，所以敏感性较双扩为高。 除上述方法外还有多种免疫沉淀分析技术，如区带电泳和双扩相结合的免疫电泳(immunoelectrophoresis)、区带电泳与火箭电泳联用的交叉免疫电泳(cross immunelec-trophoresis)，及免疫选择电泳、免疫固定电泳等，分别应用于复杂抗原成分的分析和骨髓瘤、冷球蛋白血症等临床疾病的辅助诊断。随着精密仪器的研制成功，最近又建立了散射比浊、速率散射比浊等方法，使沉淀反应技术更加敏感、精确和自动化。 (三)补体结合试验(complement fixation test，CFT)该试验是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统，来检测未知的抗原或抗体的血清学试验。有五种成分参与，分为指示系统和待检系统(已知抗原和未知抗体或已知抗体和未知抗原)。补体用新鲜豚鼠血清。方法是将已知的抗原或抗体与未知标本(可能含相应抗体或抗原)充分混合，再加入补体作用一段时间，最后加入指示系统。若待检系统有相应抗体或抗原，则能形成抗原抗体复合物，从而消耗了补体不出现溶血现象，此为阳性；相反，出现溶血则为阴性。补体结合试验的影响因素较多，正式试验前需对已知成分作一系列滴定，尤其是补体，应选择适宜的量参与反应，避免假性结果。每次试验尚需同时设立多种对照，以作为判断结果可靠性的依据。该法对颗粒性或可溶性抗原均适用，临床上常用于检测某些病毒、立克次氏体和螺旋体感染者血清内的中的抗体，亦可用于某些病毒的分型。 (四)中和反应(neutralization) 毒素、酶、激素或病毒等与其相应的抗体结合后，导致生物活性的丧失，称为中和反应。常用的中和试验有病毒中和试验和毒素中和试验。 1.病毒中和试验(virus neutralization) 是检测抗病毒抗体(中和抗体)的中和试验。当机体感染病毒后，能产生特异性的抗病毒中和抗体，可使相应的病毒失去毒力。将待检血清与病毒悬液混合，接种于细胞培养，根据对细胞的保护效果判断病毒是否已被中和，并计算出“中和指数”，即代表中和抗体效价。该试验可将已知免疫血清用于病毒鉴定，或用已知病毒检测患者血清内的中和抗体，用于流行病学调查及病毒性疾病的诊断。 2.毒素中和试验(toxinneutralization) 抗链球菌溶血素O试验(antistreptolysin O test)，简称抗“O”试验，是体外的毒素抗毒素中和试验。乙型溶血性链球菌能产生溶解人或兔红细胞的溶血素O，具有抗原性，能刺激机体产生相应的抗体。当该毒素与相应抗体作用时，毒性被中和而失去溶血活性。试验时，病人血清先与溶血素O混合，作用一定时间后加入人红细胞，若不出现溶血表明待测血清中有相应抗体(抗O)，即为阳性。本试验可根据抗体的含量并结合临床，帮助风湿病等免疫相关性疾病活动期的诊断。由于健康人血清中也有一定量的抗体，其含量与地区、季节、年龄等因素有关，因此检测到抗体并不一定表明疾病处于活动期。而当效价高达500单位以上时，才有临床意义。 |