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免疫学检测方法(3)

时间:2010-09-16 16:58来源:幸福检验 xf366.com 点击:


(二)抗体的制备
 

单克隆抗体和多克隆抗体:单克隆抗体(McAb)用杂交瘤技术制备(详见第三章),其特点:特异性好,亲和力高,只识别一个表位。多克隆抗体(polyclonal antibodies)存在于免疫动物的血清中,可通过直接分离血清获得,主要应用于免疫学诊断。也可经中性盐析和层析法进一步提出单一类别的免疫球蛋白(多为IgG),使诊断及各种研究在更精确的水平上进行。优点:可识别多个表位,缺点:特异性差,易出现交叉反应,亲和力低,通过其他抗原的吸收可获得针对单个抗原决定簇的单价因子血清。嵌合抗体和噬菌体抗体等基因工程抗体制备详见第三章。
 

四、血清学反应的种类
 

抗原抗体反应种类甚多,为叙述方便按反应现象分类介绍于下。
 

(一)凝集反应(agglutination)
 

指颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应的抗体,或可溶性抗原(亦可用抗体)吸附于与免疫无关的载体形成致敏颗粒(免疫微球)与相应的抗体(或抗原),在有适量电解质存在下,形成肉眼可见的凝集小块。
 

1.直接凝集反应(direct agglutination)  是颗粒性抗原又称凝集原与相应抗体直接结合所呈现的凝集现象,如红细胞和细菌凝集试验。主要有玻片法、试管法及微量凝集法。玻片法为定性试验,方法简便快速,常用已知抗体检测未知抗原,应用于菌种鉴定,分型及人红细胞ABO血型测定等;试管法通常为半定量试验,常用已知抗原检测待检血清中有无相应抗体及其相对含量,以帮助临床诊断和分析病情。例如临床实验室常用的诊断伤寒或副伤寒的肥达氏试验(Widal test);诊断布鲁氏菌病的瑞特氏实验(Wrig test)及诊断斑疹伤寒及恙虫病的外裴二氏试验(Weil felix test)等。
 

2.间接凝集反应(indirect passive agglutination)  是可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关的微球载体上,形成致敏载体(免疫微球),与相应的抗体或抗原在电解质存在的条件下进行反应,产生凝集,称为间接凝集或被动凝集;实验室常用的载体微球有人O型血红细胞、绵羊或家兔红细胞、聚苯乙烯乳胶、活性炭等,根据应用的载体种类不同,分别称为间接血凝、间接乳胶凝集及间接炭凝试验等。本试验主要用于某些传染病如钩端螺旋体抗原和原发性肝癌的早期诊断。间接凝集反应扩大了凝集反应的应用范围,其发展取决于载体,修饰载体使其带有化学活性基团,或选用吸附力强、稳定性高和带有色素的载体,必将演化出新的方法。
 

3.间接凝集抑制试验(indirect agglutination inhibition test)  将可溶性抗原与相应抗体预先混合并充分作用后,再加入抗原致敏的载体,此时因抗体已被可溶性抗原结合,阻断了抗体与致敏载体上的抗原结合,不再出现凝集现象,称为间接凝集抑制试验。临床常用的免疫妊娠试验(immune pregnancy test)即属此类。若以红细胞作为载体则称为间接血凝抑制试验。
 

所有上述凝集试验均可划分为正向和反向凝集试验,以已知抗原测抗体的凝集试验为正向凝集试验,通常“正向”两字省略,反之,为反向凝集试验。

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