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【摘要】 目的 探讨实时荧光定量PCR法检测病儿尿液中巨细胞病毒(CMV）DNA含量在诊断和动态监测CMV感染中的意义。方法 应用PE 5700全自动PCR扩增分析仪，检测35例临床高度怀疑有CMV感染病儿（病儿组）尿液中的CMVDNA拷贝数,随机选择45例同年龄段患非感染性疾病病儿作为对照组,比较两组CMV阳性标本中CMVDNA含量，并测定治疗后的病毒载量。同时与血清CMVIgM抗体检测结果进行比较。对部分病儿进行临床观察和随访。结果 病儿组CMV感染27例,阳性检出率为77.14%;对照组CMV感染12例,阳性检出率为26.67%。治疗后两组病儿尿液中CMVDNA拷贝数下降幅度均较大,与治疗前比较, 差异有显著性（t=4.159、5.438，P<0.01）。实时荧光定量PCR法CMV阳性检出率高于血清CMVIgM检测方法。9 例病儿随访2年,1例胆管闭锁病儿手术后CMV病毒载量仍在较高水平,1年后发展为肝硬化；4例CMV 肝炎经治疗后, 1 例CMVDNA转阴，3例仍阳性；4例无症状性感染病儿CMVDNA转阴或降至低水平。结论 实时荧光定量PCR技术检测CMV感染具有快捷、灵敏度高、特异度高等优点，量化结果便于对治疗过程进行连续监测，为病儿治疗和随访提供有效帮助。 【关键词】 巨细胞病毒感染；荧光免疫测定；聚合酶链反应
作者：刘薇，蒋玉红，孙佰秀，李海峰，罗兵 作者单位：青岛市妇女儿童医疗保健中心检验科，山东 青岛 266011； 青岛大学医学院病原生物学教研室）
巨细胞病毒(CMV)是已知病原微生物中最易引起小儿急、慢性感染的病毒之一，早期准确诊断CMV感染具有重要的意义[1]。CMV感染的临床表现多样, 以往多通过检测血清特异性IgM以及定性PCR检测病毒DNA进行诊断，但易出现假阴性和假阳性结果。本文采用实时荧光定量PCR法检测可疑CMV感染病儿尿标本中CMVDNA含量, 以评价其在CMV感染病儿诊断、治疗及动态监测中的价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料
2005年5月～2006年5月，选择青岛市儿童医院收治临床高度怀疑有CMV感染病儿（病儿组）35例，男20例，女15例；年龄2 d～1岁。根据CMV感染诊断方案[2]，当病儿出现与CMV感染相关的症状、体征时,诊断为症状性感染;当病儿无相关症状，无或有受损器官的体征和(或)实验室检查异常,诊断为无症状性感染。并选取同期45例同年龄段患非感染性疾病住院病儿作为对照组, 其中男23例，女22例。
1.2 检测方法
1.2.1 尿CMVDNA测定 采用实时荧光定量PCR方法。清洁小儿外阴, 留取新鲜尿液2 mL送检。试剂由深圳匹基生物有限公司提供, 仪器为美国PE公司PE 5700基因扩增仪，扩增结束后拷贝数小于106/L为阴性，拷贝数大于106/L为阳性，并由仪器根据标准曲线自动计算出定量结果。
1.2.2 血清CMVIgM抗体检测 采集小儿非抗凝静脉血2 mL，分离血清置4 ℃保存，采用美国HOPE公司生产ELISA试剂盒检测血清CMVIgM抗体。
1.3 治疗方法
症状性感染组病儿一经确诊有CMV感染，立即给予更昔洛韦10 mg／（kg·d）加入50 g/L葡萄糖注射液100～200 mL中静脉滴注，连用10 d为1个疗程，同时辅以保肝药物如维生素C、肝复肽等治疗。根据病情和肝功能、CMV病毒载量的复查结果决定治疗疗程。无症状性感染组病儿用更昔洛韦抗病毒治疗1个疗程。
1.4 随访
症状性感染组和无症状性感染组病儿分别于治疗后半年、1年和2年监测肝功能和CMV病毒载量，并应用无创性超声观察小儿的肝脏形态学、血流动力学相关指标改变及肝脏是否有纤维化。
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