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     血小板特异性抗原（human platelet antigens，HPA）位于血小板膜糖蛋白上。目前，通过血清学方法已确认了24个HPA，其中的12个被分成6个HPA系统(HPA1—5、15)。迄今，24个HPA中的22个HPA的分子基础已经得到了阐明，除了HPA14bw是由于编码相应糖蛋白基因的1901—1911位置上AAG3个碱基缺失外，其它均由于单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)而导致的单个氨基酸改变而产生的［1］。由于HPA的不配合而产生的血小板抗体可以导致新生儿同种免疫血小板减少症、输血后紫癜、血小板输注无效等疾病，因此对HPA进行快速而准确的分型是非常重要的。血清学方法是目前普遍应用的HPA分型方法，但因为难以获得高质量的抗血清以及从患者中难以获得大量的血小板用于血清学分型，使该方法难以展开。随着分子生物学技术的发展，许多分子生物学方法开始应用于HPA的基因分型。我们对近年来应用于HPA基因分型的各种分子生物学技术进行综述。
     1 聚合酶链反应序列特异性引物（PCR with sequence specific primers, PCRSSP）

     该方法针对每个HPA系统的2条等位基因设计2条序列特异性引物和1条公共引物，这2条序列特异性引物的3'端有1个碱基的不同。由于Taq酶没有修复引物3'端错配的能力，当引物的3'端和HPA基因完全匹配时，扩增才能进行，而3'端错配时，扩增不能进行或是以很低效率的进行。在PCR反应后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据特异性条带的有无来鉴定HPA的基因型，此外还可以使用ELISA法来检测产物。PCRSSP操作简单、快速，是目前应用最广的HPA基因分型方法，已被成功用于HPA1—16的基因分型［24］。但是该方法也存在一些缺点：容易产生非特异性扩增；对于每个HPA系统的1对等位基因，需要进行2个PCR反应；有的HPA系统基因分型错误率较高,如HPA15错误率达7.5%等［5］。为了减少非特异性扩增可以通过在引物中引入更多的错配碱基，提高退火温度以及使用热启动PCR等方法来加以解决。
     2 聚合酶链反应限制性内切酶片段长度多态性（PCRrestriction fragment length polymorphism, PCRRFLP）

     该方法首先应用PCR扩增包含HPA基因SNP位点的基因片段，然后将扩增产物进行限制性酶切。由于SNP位点碱基的不同，而产生或缺失限制性酶切位点，从而产生或缺失相应的酶切片段。电泳后根据条带的图谱来鉴定HPA的基因型。PCRRFLP已用于HPA1—15的基因分型，并获得令人满意的结果［6］。PCRRFLP的引物容易设计，扩增条件也不象PCRSSP那么严格。但值得注意的是，当应用PCRRFLP时，如果扩增产物不能被完全酶切，那么将会出现错误的结果。而且如果SNP位点处没有合适的酶切位点，那么PCRRFLP将无法进行。
     3 聚合酶链反应序列特异性寡核苷酸杂交（PCRsequence specific oligonucleotide, PCRSSO）

     该方法先用PCR扩增包含HPA基因SNP位点的基因片段，再将扩增产物固定于尼龙膜上和标记的等位基因序列特异性指示探针杂交，即正向杂交。此外还可以用生物素标记的引物扩增HPA基因，再将扩增产物与固定在尼龙膜上的相应的等位基因序列特异性探针杂交，此为反向杂交。最后可以通过底物显色或化学发光来检测底物。该方法已被成功用于HPA1、4、8的基因分型。但PCRASO技术信躁比较低，结果有时难以判读，而且要求严格的实验条件，这也限制了该技术的应用。
     4 同源双链优先形成试验（preferential homoduplex formation assay, PHFA）