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乙型肝炎是HBV感染引起的全球性疾病，而我国是乙型肝炎的高度流行区。据调查统计，在我国人群（>3岁）中HBsAg携带率为9.09%，HBV流行率高达60%以上［1］。发病例数约为50万［2］，乙型肝炎的主要传播途径是临床输血传播，我国各级采供血机构对乙型肝炎的筛查检测为酶联免疫检测，但由于酶联免疫吸附法（ELLSA）检测“窗口期”的问题，标本检测漏检在所难免。我站自2008年9月至2009年1月，对无偿献血者血液样本HBsAg ELISA检测阴性的合格样本（共计26 109份）行PCR检测，对PCR检测HBV DNA阳性的血液做报废处理，并对这种献血者跟踪验证，每两周采血做HBV两对半免疫检测。报告如下。 1 资料与方法
1.1 一般资料
选择我站无偿献血者HBsAg ELISA检查合格血液标本（共计26 109份），分离血浆备用。DP1000核酸提取仪（上海科华实验系统有限公司），ABI7300荧光PCR扩增仪（上海科华）。试剂乙型肝炎荧光PCR试剂盒（上海科华生物有限公司，批号：20080328）。
1.2 方法
1.2.1 核酸筛查的样本准备和汇集：采用Pooling8方式，分别取所选定的8份血浆各150 μl至1.5 ml离心管中振荡混匀，加入40 μl浓缩剂，再加入50 μl促沉剂，混匀后4℃离心1 h（26 000 r/min），弃去离心管内上层液体，剩余约160 μl标本，振荡混匀，低速离心数秒后用于核酸提取。
1.2.2 核酸提取：从每个离心管中吸取100 μl待测汇集标本，加入去抑制剂磁珠混合溶液20 μl，再加入130 μl裂解液，采用核酸提取仪，根据仪器提示，依次加入洗涤液A、B、C及洗脱液，分离提取HBV DNA模板。
1.2.3 PCR扩增检测：在装有已配制好的PCR反应液的反应管中分别加入15 μl已处理好的标本。然后将PCR反应管放入ABI7300荧光PCR扩增仪进行扩增检测。PCR反应程序：通过预变性：95℃，2 min；变性：95℃，10 s；退火：55℃，20 s；延伸：72℃，20 s循环检测。
1.3 结果判定
测定CT值≥50，并且内标CT＜45的标本为阴性标本，测定CT值在40~50的标本为灰区标本，建议复测或随访，测定CT值<40的标本为HBV DNA阳性标本，须进行拆分。
1.4 阳性混合样本的拆分
混合样本阳性者均应进行拆分，找到各个样本并分别进行单独的核酸检测，以确定阳性样本的真正来源。并对HBV DNA阳性献血者血液做报废处理。
1.5 随访
所有HBsAg阴性，HBV DNA阳性的样本都进行随访，并做HBV两对半免疫检测，再次采血应用不同于二次筛查的试剂进行HBsAg ELISA检测，以便查找ELISA检测与核酸检测结果不一致的原因。
2 结果
2.1 PCR筛查结果
26 109份HBsAg阴性无偿献血标本，PCR检测结果为阴性26 107份，阳性2份，ELISA漏检率为7/10万。
2.2 对2份PCR阳性献血者血样做HBV两对半免疫检测结果
见表1。表1 2份PCR阳性标本乙肝两对半检测结果（略）
2.3 2名PCR阳性献血者追踪随访结果
见表2。表2 2名PCR阳性献血者HBsAg追踪随访结果（略）
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