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血液检验室内质控存在的若干问题及其对策

时间:2010-11-10 15:54来源:幸福检验 整理 点击:

   室内质量控制(IQC)是由实验室人员采用一系列方法,连续的评价本实验室工作的可靠程度,确定报告能否发出,是保证实验室工作质量的重要措施。目前血站系统检测抗HCV、抗-HIV HBsAg均采用ELISA法。ELISA有其自身的特点如灵敏度较高,同时影响因素也较多,这就更需加强质量控制。本文就实验过程中出现的一些问题及其对策报告如下。

 
1 质控
 
  室内质控的开展要求有高质量的质控物,质控物的好坏直接影响监测,一般基层单位均选用卫生部临检中心提供的免疫质控血清,其具有良好的质量保证,但是在贮存运输和使用过程中受许多因素的影响。质控物的购买应避开7、8、9高温季节,以免邮寄过程中造成含量下降。质控物要求-20℃保存,而质控物含量较低,4℃存放也会使含量下降,一般HBsAg使用3d,抗-HCV使用1周即需更换。避免反复冻融,因反复冻融能使蛋白质变性抗原成份及空间构象发生改变。还可选用上海或其他血液中心提供质控品,作可比性试验以验证。
 
2 试剂
 
  1994年10月起卫生部对体外诊断试剂实行统一管理批批检定。目前使用的国内试剂厂家很多,能通过批批检只是起码要求,其灵敏度和特异性都有差异。加之运输储存多种因素影响,到用户使用时质量已经发生了不同程度的变化。选购试剂时,省级以上的血液中心可以成立“试剂评价系统” [1] ,由质控科、检验科、研究所共同参与组成,研究所研制供应血清盘并制定标准,质控科负责用研究所供应血清盘对新购试剂评价,检验科在大标本的筛选中评价现用试剂日间差、板间差、初复检阳性率比较及操作可行性;基层单位用量少每批都做Panel是不现实的,希望卫生主管部门能否提供一种排除商业性具有指导意义的方案或者提供价低质高的血清盘。就目前可参考权威部门发布的试剂评价结果,还可到大血站、临检中心等单位了解一下哪种厂家哪一批次的质量可靠,然后向厂家查询丙肝的包被片段,初检试剂选片段多而全、灵敏度高的,复检选特异性好的试剂。
 
3 加样与稀释
 
  3.1 由于免疫试验加样仅10μl,多加或少加1μl就可造成10%的误差,因此移液器的准确性需经常校验,最好使用进口移液器,同时移液器和移液头间连接应严密,建议取样时移液头应刚进液面,以免粘带血清。稀释液勿用滴瓶滴加,以免造成稀释倍数的变化,对灰带区造成误判,使用移液器加样较稳定。
 
  3.2 稀释方式①在板中加入100μl稀释液再加10μl标本,待样品全部加完混匀;②预先进行1∶11稀释然后加到每孔中;③在板中加入100μl稀释液再加10μl标本,同时吹吸3次混匀。根据陈宇 [2] 的报道第1种方式易致非特异性IgG吸附到包被抗原或固相载体上,第2种方式在大量标本检测时亦不适用,以第3种方式为好。
 
4 温育
 
  37℃温育常采用3种方式即恒温培养箱、水浴箱和电热块,根据张利等 [3] 的报道以恒温培养箱为佳,由于培养箱中板的周围都是37℃,而水浴箱的温度指标的是水的温度,虽然酶标板漂浮在37℃水浴中板底37℃,但空气温度在开盖时会下降(尤其在冬季),温度上升比培养箱慢,达到37℃所需时间长,导致吸光度下降。
 
5 洗板
 
  一般基层单位洗板机不提倡使用96孔头而选用8或12孔头,应随时注意孔头是否堵塞,同时要求洗板后残液<2μl即人工扣板垫纸不湿,浸泡时间>45s。洗液预先用合格的蒸馏水配制并充分溶解,保持PH正常。定期清洗容器防止长菌长霉,这些都是防止花板、本底增高的重要措施。
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