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荧光定量PCR联合ELISA检测丙型肝炎病毒的临床应用研究(2)

时间:2011-01-07 19:12来源:幸福检验 整理 点击:
    1  对象和方法
    1.1  对象
    选取佳木斯大学附属第一医院2006—01~2007—08门诊和住院患者117例,男67例,女50例,年龄14~73岁,平均45.0岁。全部病例均为已确诊慢性丙型肝炎患者,排除其它型肝炎引起肝损伤的患者。诊断严格按照2000年西安中华医学会传染病与寄生虫分会、肝病学会联合修订的病毒性肝炎防治诊断标准。根据HCV-RNA含量(拷贝/mL)将资料分为<1×102、102~4、104~5、105~6和>1065个组。
 
    1.2  方法
    1.2.1  血清HCV-RNA定量检测
    HCV-RNA的检测采用FQ-PCR,试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供,核酸扩增仪为美国ABI公司的PE7700型全自动实时荧光定量PCR仪,参考值<1×102拷贝/mL。
    1.2.2  抗-HCV检测 
    抗-HCV检测采用ELISA法,严格按试剂盒说明书操作,试剂盒由沈阳惠民生物工程有限公司提供。
    1.2.3  ALT检测
    血清ALT检测采用酶动力学法,正常参考值:5~40U/L(37℃),试剂采用日本和光试剂,检测仪器为日本Olympus AU1000全自动生化分析仪
    1.2.4  统计学处理 
    采用SPSS11.0统计软件,计数资料用χ2检验,计量资料以(x±s)表示,组间比较用t检验,对HCV-RNA含量的对数值与ALT含量进行线性相关关系分析和相关性显著性检验,P<0.05为差异有显著性。
    2  结果
    2.1  HCV-RNA含量与血清抗-HCV表达
    见表1。117例标本经FQ-PCR定量检测,有87例HCV-RNA含量高于1×102拷贝/mL,其中抗-HCV阳性75例,阳性率为86.2%(75/87),而低于1×102拷贝/mL血清标本中,抗-HCV阳性率为50.0%(15/30) ,经相关性分析,两者有明显相关性(χ2=16.474,P<0.05)。抗-HCV阳性率随着HCV-RNA含量的升高而增高,经相关性分析,其阳性率与HCV-RNA含量呈正相关(r=0.881,P<0.05)。表1  117例标本HCV-RNA含量及抗-HCV检测结果(略)
  2.2  HCV-RNA含量与血清ALT含量关系
    见表2。从表2中可看出,87例HCV-RNA含量高于1×102拷贝/mL血清标本中,有50例ALT异常,其异常率随着HCV-RNA含量的升高而增高,经相关性分析,ALT异常率与HCV-RNA含量呈正相关(r=0.921,P<0.05),而ALT水平和HCV-RNA含量之间亦呈正相关(r=0.894,P<0.05)。表2  117例标本HCV-RNA与血清ALT含量关系(略)
  2.3  FQ-PCR联合ELISA检测结果
    见表3。FQ-PCR检测敏感性为74.4%(87/117),漏检率为25.6%(30/117)。ELISA法检测敏感性为76.9%(90/117),漏检率为23.1%(27/117),两种方法检测血清标本敏感性差异无显著性(χ2=0.208,P>0.05)。两种方法联合检测敏感性为92.3%(108/117),漏检率为7.7%(9/117)。联合检测敏感性明显高于单独检测 (χ2=10.636,P<0.05)。表3  各种实验方法检测丙肝病毒敏感性比较(略)
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