|
近日，重庆医科大学附属第二医院消化内科蔡园、何松、罗娜等人共同发表论文，旨在探讨HBV复制过程中HBx蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响。研究指出，HBx蛋白能通过调节细胞周期中各蛋白的表达，使细胞由静止期（G0）进入DNA合成前期（G1）并停滞于G1期，从而促进HBV的复制。该文发表在2012年第20卷第3期《中华肝脏病杂志》上。
采用原代小鼠肝细胞为研究系统，用野生型HBV质粒（pHBV）和HBx蛋白表达缺失的HBV质粒（pHBV△X）分别转染细胞。Western blot检测细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E、cyclin A及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16（p16）、p21的表达水平；实时荧光定量PCR和Southern blot检测HBVDNA复制水平。
新分离肝细胞和原代培养24、48、72 h肝细胞的细胞周期蛋白表达水平无明显差异；转染48h后，pHBV组细胞与pHBV△X组细胞周期蛋白条带灰度值相比，前者cyclin D1、p21、cyclin E表达量较高，p16的表达量较低。培养72h后提取HBV DNA，Southem blot检测HBV DNA复制中间体松散环状DNA、双链线性DNA、单链DNA的水平，经条带灰度扫描，pHBV组的水平明显高于pHBV△X组及空白对照组；实时荧光定量PCR检测HBV DNA复制水平，pHBV组也明显高于pHBV△X组。
|