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2.3 标准曲线的制备
取“2.2”项的硫酸铵系列标准溶液各1 mL，分别加入10 %的钨酸钠溶液、0.5 mol/L硫酸溶液各0.5 mL，涡旋震荡1 min，4 000 r/min离心5 min，分取上清液1 mL，依次加入酚显色剂和碱性次氯酸钠溶液各1 mL，涡旋1 min后置37 ℃水浴20 min，以空白管校正后于630 nm处测定OD值；将所测得的吸收度OD值对浓度进行线性回归处理得回归方程：OD=0.0017C+0.23，相关系数r=0.9964，根据(NH4)2SO4与游离氨的定量关系，即得游离氨浓度在5～200μmol/L的定量线性范围（见图1）。
2.4 临床样本的测定
参考国内外有关文献，经优化后测定BA的方法为：离体血液立即加入过量定量的10%钨酸钠及0.5 mol/L硫酸溶液，使蛋白沉淀的同时，血液中的氨与硫酸形成硫酸铵而存留于血滤液中，再以酚次氯酸钠显色剂显色后于波长630 nm处测定OD值，即可定量测定BA。
2.5 方法的回收试验
按“2.2”项的方法分别配制高、中、低（400、200、40 μmol/L）的硫酸铵标准溶液适量，各取1mL分别加入1 mL无氨正常血浆，混匀后精密量取1 mL按2.4项下的方法分别精密加入0.5 mL 10 %钨酸钠和0.5 mol/L硫酸溶液各0.5 mL，以下按准曲线项下相应的方法处理并分别测定其OD值，将测得的OD值代入标准曲线计算测得量与回收率，结果见表1。表1 血氨回收试验（略）
2.6 精密度试验
配制低、中、高（25、50、75 μmol/L）3个浓度含无氨正常血浆的硫酸铵溶液各3份，日内4 ℃冷藏保存，每间隔1 h按2.3标准曲线项下的方法测定1次，连续测定5次。另取相同样品18 ℃冷冻保存，每日测定1次，连续测定5日。所得OD值代入标准曲线方程计算得游离氨浓度，结果见表2。表2 血氨精密度试验（略）
2.7 稳定性试验
取硫酸铵溶液适量配制成75 μmol/L含无氨正常血浆的硫酸铵溶液，分别置于4 ℃冰水浴和18 ℃条件下储藏保存，每次平衡5 min后各取1 mL样品，按“2.6”精密度试验项下的测定方法，4 ℃下保存的标本在1 d内每间隔2 h测定1次，每次平行测定5份，直至14 h共测定8次；18 ℃条件下保存的标本每天定时测定1次，每次平行测定5份，连续测定7 d，将测得的OD值通过标准曲线方程计算游离氨的实际含量，结果见表3。由表可知新鲜血中游离氨极不稳定，常温和4 ℃冷藏保存均不稳定，宜在2 h内测定，在18 ℃下保存也宜在24 h内测定。表3 血氨稳定性试验（略）
2.6 临床应用
选择我院近2年来的住院患者，除外肝、胆、肾疾病患者。脑梗塞患者28例，其中男16例，女12例，平均年龄（55.8±10.5）岁；脑溢血患者25例，其中男15例，女10例，平均年龄（60.4±15.4）岁；脑炎患者10例，其中男6例，女4例，平均年龄（39.8±13.5）岁。全部病例均经临床及CT和（或）MRI检查。对照组25例，经检查全部健康正常，其中男13例，女12例，平均年龄（57.2±14.3）岁。全部患者均在昏迷期及恢复期各采取肘静脉血1～2 mL，肝素抗凝，立即用上述方法测定血氨，对照组也同时采血测定血氨。
结果对照组血氨含量为（56.53±29.15）μmol/L，脑梗塞组昏迷期血氨含量为（179.00±108.59）μmol/L，恢复期为（66.89±26.67）μmol/L，昏迷期与对照组经χ2检验差异有统计学意义（χ2=12.68，P<0.05），恢复期与对照组相比差异无统计学意义（χ2=5.42，P>0.05）。脑溢血组昏迷期血氨含量为（146.97±72.41）μmol/L，恢复期为（60.46±24.39）μmol/L，昏迷期与和对照组比较差异有统计学意义（χ2=11.78，P<0.05），恢复期与对照组相比差异无统计学意义（χ2=4.68，P>0.05）。脑炎组昏迷期血氨含量为（197.17±62.10） μmol/L，恢复期为（59.83±39.59）μmol/L，昏迷期与对照组显著增高（χ2=9.72，P<0.05），而恢复期与对照组相比差异亦无统计学意义（χ2=3.95，P>0.05）。
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