|
20世纪80年代前，世界卫生组织（WHO）一直将心肌酶谱活性作为急性心肌梗死（AMI）的诊断标准之一。20世纪80年代末，科研人员发现，肌钙蛋白（troponin,Tn）的敏感性和特异性高于磷酸肌酸激酶（CK）、磷酸肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶和天冬氨酸氨基转移酶等标志。心肌肌钙蛋白I(cTnI)可检出微小心肌损害，成为心肌细胞损伤敏感性和特异性最强的标志物之一，是公认的快速诊断AMI和急性冠脉综合征（acute coronary syndromes, ACS），以及协助ACS危险分层和反映其预后的主要生化标志。 CTnI的物生学特性 Tn是由TnI、TnT和TnC三个亚单位组成，其中TnI是抑制性亚单位，可抑制肌球蛋白与肌动蛋白组合，阻止肌肉收缩，TnT是与原肌球蛋白结合的亚单位；TnC是与钙离子结合的受体。 1 CTnI的心肌特异性和抗原性 TnI有三种亚型：分子量分别为24kD的cTnI,20kD的快骨骼肌和慢骨骼肌肌钙蛋白I（sTnI）。CTcI与sTnI的氨基酸序列有40%的异源性，cTnI氨基端有31个氨基酸是sTnI所不具有的；两者在人体中的含量相差也较大，cTnI为5.7±0.6mg/g, sTnI为8.4±2.7µg/g，比值为680±75；cTnI与sTnI的交叉反应最早认为是2%，后来由于检测技术的发展，交叉反应已降至0.007%。在出生9个月后，新生儿心肌中仅存cTnI，且无任何亚型。在个体发生的全过程中，无论骨骼肌受到任何病理刺激，均不表达cTnI,,所以cTnI具有高度的心肌特异性。人cTnI有五个螺旋区域，呈伸展式构型。抗体识别相应抗原表位不依赖于蛋白质的三级结构，使nTnI氨基酸序列易被免疫系统识别，故cTnI具有较强的抗原性。 2 cTnI的存在方式 cTnI大部分以CTnI-CTnC复合物形式存在于心房肌和心室肌细胞的胞质中，3%的CTnI游离于心肌细胞的胞质内，在心肌细胞膜完整状态下，cTnI不能透过细胞膜入血循环。当心肌损伤时，外周血中90%以上的cTnI，仍然以cTnI-cTnC复合物形式存在，游离的cTnI较少。 CTnI的测定方法很多，1987年Commins采用多克隆抗体建立放射免疫分析法检测cTnI浓度，最低检测浓度为10µg/L，与sTnI只有2%的交叉反应，检测时间为24-36h。Larued等应用的cTnI单抗酶免疫检测法，最低浓度为0.2µg/L，并与sTnI无交叉反应，检测时间为30min以内，明显优于Commins法。为了使检验更便捷，有研究者将金标记或硒标记单克隆抗体与免疫层析技术相结合，用纸条法定量或半定量床边检测cTnI浓度，根据测试纸条上线条是否呈红色来制定cTnI浓度，最低检测值为0.4µg/L。临床上常用的方法有： 1 Stratus检测法 Stratus检测法是一种先进的自动双位点荧光酶免疫定量检测法，使用两种cTnI单克隆抗体，特异性高，灵敏度为0.35µg/L。当AMI临界值为1.5µg/L时，不精密性（CV）小于或等于10%，检测时间为10min。 2 AxSYM检测法 AxSYM检测法是一种近几年来才开始应用的cTnI检测法，它的基本原理与Stratus法有相似之处，是一种以特异性cTnI单克隆抗体为捕获抗体，以cTnI多克隆抗体作酶标记抗体，建立两步夹心酶免疫法，检测游离cTnI和复合体中cTnI。该法首先将包被着cTnI单克隆抗本的微粒、碱性磷酸酶（SLP）标记的cTnI多克隆抗体以及标本中的cTnI相混合，然后加入底物MUP（4-methylum-bellifery 1 phosphate），产生荧光物质的比率与样本中cTnI的浓度有关，该方法与Stratus检测法有显著相关性（r=0.88）即AxSYM=3.50（Stratus检测法）-1.10，两种方法对AMI检测的一致性为95.3%。该方法灵敏度为0.14±0.05µg/L，POC曲线所确定的AMI临界值为2.0µg/L；总不精密性为6.3%-10.2%，检测时间为15-20min。 |