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血液DNA抽提的质量和速度是影响组织相溶性抗原(HLA)基因分型效果的一个主要因素，目前普遍采用的标准酚-氯仿抽提法，因耗时较长，难以满足临床需求。为此，我们建立了NP-40法及辛酸法，进一步缩短时间，简化了操作步骤。现将NP-40法、辛酸法与标准酚-氯仿抽提法对比研究结果报告如下。 一、资料和方法
本工作以30份全血及15份淋巴细胞为研究标本。(1)全血标本为新鲜或冻存的乙二胺四乙酸(EDTA)或酸-枸橼酸-葡萄糖(ACD)抗凝血3 ml。(2)淋巴细胞为HLA-A、B抗原血清学分型或淋巴细胞毒交叉试验中剩余的淋巴细胞。DNA提取方法有3种：
1.标准酚-氯仿提取法：按常规方法进行(具体步骤略)。
2.NP-40法：根据John等报道的NP-40法，进行部分改进。其步骤简述如下：取EDTA抗凝血0.5 ml，加0.5 ml溶液Ⅰ(10 mmol/L Tris-盐酸，10 mmol/L氯化钾，10 mmol/L 氯化镁)，加入16 μl NP-40混匀；3 000×g低速离心10分钟，去上清液，加80 μl溶液Ⅱ(10 mmol/L Tris-HCl，10 mmol/L氯化钾，10 mmol/L氯化镁，0.5 mol/L氯化钠，0.5%SDS，2 mmol/L EDTA)悬浮沉淀；以下进行酚-氯仿抽提(步骤同标准酚-氯仿抽提法)。
3.辛酸法：在Planelles等的方法进行部分改进：取EDTA或ACD抗凝血1 ml，加Triton X-100 20 μl，翻转混匀4～5次，13 000×g离心10秒；去上清，加500 μl三蒸水、500 μl磷酸盐缓冲液、100 μl 2%脱氧胆酸钠混匀，13 000×g离心30秒；去上清，沉淀加2mol/L NaCl 1 ml，10%SDS 50 μl，辛酸(预稀释成工作浓度，无水乙醇：辛酸=5∶1)50 μl震荡1分钟，13 000×g离心1分钟；取下层水相加1 ml无水乙醇沉淀DNA，以70%乙醇洗2次，以三蒸水100 μl溶解DNA(60℃助溶5分钟即可使用)。
统计学处理，多组间均数的比较用方差分析。
二、结果
1.DNA的含量及纯度测定：30份EDTA或ACD抗凝血标本分别采用以上3种方法进行DNA抽提，以岛津UV-240紫外光法测定DNA的含量及260 nm/280 nm的吸光度(A)值比率，DNA的量按1 ml全血所提取的DNA量计算(附表)。
附表 3种PCR模板制备方法的DNA含量、纯度、扩增效果
及所需时间的比较(x±s)
方 法DNA含量(μg)A260/280nm时间(min)
标准酚-氯仿18.5±4.12.01±0.30840
NP-4017.2±3.21.98±0.1960
辛酸18.7±4.12.02±0.3020
三组间均数比较P值＞0.05＞0.05
2.提取DNA的琼脂糖凝胶电泳结果：3种方法所提取的DNA，经1%琼脂糖凝胶电泳检测，所提DNA带型整齐，提示DNA均无明显降解。
3.HLA基因分型效果：采用PCR-SSP法对3种方法制备的30份DNA标本进行HLA-DR基因分型，3种方法均很稳定，扩增成功率100%(附表)，同一标本中不同方法提取DNA的基因分型结果一致；另外分别采用NP-40和辛酸法对15份淋巴细胞标本进行DNA抽提也均获成功，扩增效果满意，HLA基因分型结果与其全血标本完全一致。
4.3种DNA制备方法所需时间见附表。
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