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引起酶免反应显色淡、灵敏度偏低有很多因素，下面只介绍几种可能的较常见的原因： 1. 试剂盒在运输途中时间太长，温度太高；要求运输时置于保温箱内运输，并放足够数量的冰块，尽量缩短运输时间。
2. 试剂盒超过有效期；建议不要使用超过效期的试剂盒。
3. 试剂、样品使用前未能平衡；建议使用前于室温平衡30分钟左右。
4. 试剂开启时间过长，长菌；建议试剂开启后应该于半个月内用完。
5. 移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸头内壁挂液太多或内壁不清洁。建议使用一次性的吸头。
6. 恒温箱温度不足37℃ （或水浴锅温度不足37℃）；建议孵育反应期间应该控制好温度。
7. 孵育反应时间不足；建议应准确记时。
8. 洗涤时冲击力太大，洗涤液浸泡时间太长，洗涤次数增加。建议减少洗涤冲击力，按说明书要求的时间，准确记录洗涤时间。
9. 显色剂滴加量不足或顺序颠倒，或混合后加入；建议应该先加显色剂A，后加显色剂B，不可将A、B液混合后加入。
10. 显色剂反应时间不足；建议准确记时。
11. 蒸馏水水质有问题；建议检查蒸馏水。
12. 样品用叠氮钠防腐，抑制了酶的反应；建议不能加叠氮钠防腐。
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