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微生物鉴定常见生化反应及应用价值(4)

时间:2010-11-05 10:41来源:幸福检验 xf366.com 点击:

  (2)方法:

  ①玻片法:取兔血浆和盐水各一滴,分别置于洁净的玻片中央,用接种环取待检菌分别与血浆和盐水混合。

  ②试管法:取试管2支,各加0.5ml人或兔血浆,挑取被检菌和阳性对照菌分别加入血浆中并均匀,置37℃水浴3-4小时,每30min观察1次结果。

  (3)结果:

  ①玻片法:以血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象为阳性。

  ②试管法:如有凝块或整管凝集出现为阳性。2h后无上述现象出现,则放置过夜后再观察。

  (4)应用:凝固酶试验是鉴定葡萄球菌致病性的重要试验,也是葡萄球鉴别时常用的试验。

 

CAMP试验

  (1)原理:B群链球菌(无乳链球菌)产生一种“CAMP”因子,可促进葡萄球菌的β-溶血素溶解红细胞的活性。因此,可在两种细菌(B群链球菌和葡萄球菌)的交界处溶血力增强,出现半月型透明溶血区。

  (2)培养基:血琼脂平板。

  (3)方法:在羊血或马血琼脂平板上,先以产β-溶血素的金黄色葡萄球菌划一横线接种。再将待检菌与前一划线作垂直接种,两者不能相交,应相距0.5-1cm,于35℃孵育18~24h,观察结果。每次试验应做阴阳性对照。

  (4)结果:两种细菌划线交接处出现箭头型溶血区为阳性。

  (5)应用:在链球菌中,只有B群链球菌CAMP试验阳性,故可作为特异性鉴定。其他链球菌均为阴性。

 

胆汁溶菌试验

  (1)原理:胆汁或去氧胆酸钠能导致某些细菌溶解,一方面是由于胆汁或去氧胆酸钠降低了细菌细胞膜上的表面张力,使细菌的细胞膜破损或使菌体裂解。另一方面可能是由于胆汁激活细菌体内的自溶酶,加速了细菌的自溶。

  (2)方法:

  ①试管法:用纯培养物制备1.8ml生理盐水浓菌悬液,pH调至7.0,分装两支试管,各0.9ml。其中一管加10%去氧胆酸钠为试验管,另一管加0.5ml生理盐水作对照。35℃孵育10-30分钟,观察结果。

  ②平板法:在血平板上选取单个可疑菌落,作好标记,直接在菌落上加1接种环10%去氧胆酸钠(pH7.0),置35℃孵育30min(平板不要翻转)观察结果。

  (3)结果:

  ①试管法:以“加胆盐的培养物透明,而对照管仍混浊”为阳性。

  ②平板法:如菌落消失,仅留下溶血区为阳性,菌落不消失为阴性。

  (4)应用:主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴定,前者卫阳性,后者为阴性。

 

O/129抑菌试验

  (1)原理:O/129(二氨基喋啶)对弧菌属细菌有抑制作用,而对气单胞菌属无抑制作用。

  (2)碱性琼脂平板。

  (3)方法:用棉拭子将待检菌菌悬液均匀涂布于碱性琼脂平板上,将O/129诊断纸片(含药40μg/片)贴于平板上,置35℃孵育18~24h,观察结果。

  (4)结果:出现抑菌环为敏感,无抑菌环者为耐药。

  (5)应用:主要用于弧菌科的属间鉴别,弧菌属和邻单胞菌属菌为敏感,气单胞菌属菌为耐药。

 

杆菌肽试验

       (1)原理:A群链球菌对杆菌肽几乎是100%敏感,而其它群链球菌对杆菌肽通常耐药。故此试验可对链球菌进行鉴别。

  (2)培养基:血琼脂平板。

  (3)方法:用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上,稍干后贴一张含0.04U的杆菌肽纸片,置35℃ 孵育18~24h,观察结果。

  (4)结果:抑菌环直径大于10mm为敏感,抑菌环直径小于10mm为耐药。

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