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微生物鉴定常见生化反应及应用价值(2)

时间:2010-11-05 10:41来源:幸福检验 xf366.com 点击:

  (2)培养基:氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照培养基。

  (3)方法:将待检菌分别接种于1支氨基酸(赖氨酸,鸟氨酸或精氨酸)脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管(无氨基酸),各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油,35℃孵育1~4d,每日观察结果。

  (4)结果:对照管应为黄色,若为溴甲酚紫指示剂,则测定管呈紫色则为阳性,若测定管呈黄色为阴性。若对照管呈现紫色则试验无意义,不能做出判断。

  (5)应用:主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。如沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外,其余沙门菌的赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。志贺菌属除宋内和鲍氏志贺菌外,其他志贺菌均为阴性。

 

碳源和氮源利用试验

  是细菌对单一来源的碳源利用的鉴定试验。

  在枸橼酸盐培养基中,细菌只有利用枸橼酸盐作为碳源,分解生成碳酸钠使培养基变碱性,pH指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿色变为深蓝色。

  常用的试验方法有枸橼酸盐利用试验、丙二酸盐利用试验。

 

 枸橼酸盐利用试验

  (1)原理:某些细菌能利用枸橼酸盐作为唯一碳源,而在此培养基上生长,并分解枸橼酸盐生成碳酸钠,使培养基变碱性。

  (2)培养基:枸橼酸盐培养基。

  (3)方法:将待检菌接种于枸橼酸盐培养基上,置35℃孵育1~4d,逐日观察结果。

  (4)结果:若用溴麝香草酚兰指示剂,斜面出现菌落或菌苔,培养基由淡蓝色变蓝色为阳性;不能利用枸橼酸盐作为碳源的细菌,在此培养基上不能生长,培养基不变色,仍为绿色为阴性。

  (5)应用:用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。在肠杆菌科中埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均为阴性,沙门菌属、克雷伯菌属通常阳性。

 

丙二酸盐利用试验

  (1)原理:某些细菌能利用丙二酸盐作为唯一碳源,丙二酸盐被分解生成碳酸钠,使培养基变碱。

  (2)培养基:丙二酸盐培养基。

  (3)方法:将待检菌接种于丙二酸盐培养基中,置35℃孵育24~48h,观察结果。

  (4)结果:培养基由淡绿色变为蓝色为阳性。颜色无变化为阴性。

  (5)应用:肠杆菌科中属间及种的鉴定。克雷伯菌属为阳性,枸橼酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属中有些菌种也呈阳性,其它各菌属均为阴性。

 

氧化酶试验

  (1)原理:氧化酶(即细胞色素氧化酶),是细胞色素氧化酶系统中的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌,首先使细胞色素C氧化,再由氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化,生成有色的醌类化合物。因此,本试验结果与细胞色素C的存在有关。

  (2)方法:

  1)菌落法:直接滴加试剂于被检菌落上。

  2)滤纸法:取洁净滤纸一小块,蘸取菌少许,然后加试剂。

  3)试剂纸片法:将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片,取菌涂于试剂纸上。

  (3)结果:细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色,为阳性。无色为阴性。为保证结果的准确性,分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。

  (4)应用:主要用于肠杆菌科细菌和假单胞菌属的鉴别,前者阴性,而后者阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。

 

过氧化氢酶试验(触酶试验)

  (1)原理:具有过氧化氢酶的细菌,能催化过氧化氢成为水和原子态氧,继而形成氧分子,出现气泡。

  (2)方法:取洁净玻片1张,用接种环挑取细菌,加3%过氧化氢数滴,立即观察结果。

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