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微生物鉴定常见生化反应及应用价值

时间:2010-11-05 10:41来源:幸福检验 xf366.com 点击:

明胶液化试验

  (1)原理:某些细菌可以产生一种胞外蛋白水解酶(明胶酶),能使明胶分解为氨基酸,使明胶失去凝固能力而液化,因而使半固体的明胶培养基成为流动的液体。

  (2)方法:将待检菌接种于明胶培养基中,22℃培养7d或更长时间,每天观察结果有无凝固。

  (3)结果:如无凝固,则表示明胶已被水解,液化试验阳性。如凝固,则继续培养。

  (4)应用:肠杆菌科细菌的鉴别,如奇异变形杆菌、普通变形杆菌、沙雷菌属和阴沟肠杆菌等到能液化明胶,肠杆菌科中的其它细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。另外,许多假单胞菌也能产生明胶酶而使明胶液化

 

吲哚试验(靛基质试验)

  (1)原理:某些细菌具有色氨酸酶,能分解蛋白胨水中的色氨酸产生吲哚,当加入吲哚试剂(对二甲氨基苯甲醛)后则形成红色的玫瑰吲哚。

  (2)培养基:蛋白胨水培养基。

  (3)方法:将待检菌接种于富含色氨酸的蛋白胨水培养基中,35℃孵育24~48h,沿试管壁慢慢加入吲哚试剂,观察结果。

  (4)结果:于两液面接触处出现红色为阳性,无色为阴性。

  (5)应用:主要用于肠杆菌科细菌的鉴定,如大肠埃希菌与产气肠杆菌,肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌等的鉴别。

 

硫化氢试验

  (1)原理:某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸产生硫化氢,硫化氢遇亚铁离子或铅离子则结合形成黑色沉淀物(硫化铁或硫化铅沉淀)。

  (2)培养基:醋酸铅培养基。

  (3)方法:将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基中,于35℃孵育24h -48h,观察有无黑色沉淀出现。

  (4)结果:培养基变黑为阳性,不变为阴性。

  (5)应用:主要用于鉴别肠杆菌科中属及种的鉴别,如沙门菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、爱德华菌属等为阳性,其它菌属大多为阴性。但沙门菌属中亦有部分硫化氢阴性菌株,如甲型副伤寒、仙台、猪霍乱沙门菌等。

 

尿素分解试验

  (1)原理:某些细菌具有尿素分解酶,能分解尿素产生大量的氨,使培养基呈碱性。

  (2)培养基:尿素培养基。

  (3)方法:将待检菌接种于尿素培养基,于35℃孵育18~24h小时观察结果。

  (4)结果:培养基呈碱性,使酚红指示剂变红为阳性,不变为阴性。

  (5)应用:主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性,另外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性,而斯氏和产碱普罗威登菌阴性。

 

苯丙氨酸脱氨酶试验

  (1)原理:测定细菌是否产生苯丙氨酸脱氨酶。细菌产生的苯丙氨酸脱氨酶使苯丙氨酸脱氨后生成苯丙酮酸,加入氯化铁试剂后产生绿色反应。

  (2)培养基:苯丙氨酸琼脂培养基。

  (3)方法:将待检菌大量接种入苯丙氨酸琼脂培养基中,35℃孵育18~24h,滴加10%三氯化铁试剂3~4滴,自斜面上方流下。

  (4)结果:有绿色出现为阳性。应立即观察结果,延长反应时间会引起退色。

  (5)应用:主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属均为阳性,肠杆菌科其它细菌均为阴性。

 

氨基酸脱羧酶试验

  (1)原理:某些细菌可产生氨基酸脱羧酶,能分解氨基酸使其脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性,可用指示剂指示出来。

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