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微生物鉴定常见生化反应及应用价值(3)

时间:2010-11-05 10:41来源:幸福检验 xf366.com 点击:

  (3)结果:若立即出现大量气泡为阳性。无气泡为阴性。

  (4)应用:革兰阳性球菌中,葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶,但链球菌科阴性,故该试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。

 

硝酸盐还原试验

  (1)原理:硝酸盐还原反应包括两个过程:一是在合成代谢过程中,硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨,再由氨转化为氨基酸和细胞内其它含氮化合物;二是在分解代谢过程中,硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。硝酸盐还原过程可因细菌不同而异。有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐,如大肠埃希菌等;有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵;有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮,如沙雷菌属;有的细菌还可以将其还原产物在合成性代谢中完全利用。

  (2)培养基:硝酸盐培养基。

  (3)方法:将待检菌接种于硝酸盐培养基(内含小倒管)中,35℃孵育1~4d。将甲、乙等量混合液(用时混合)(约0.1ml)加于试管内,立即观察结果。

  (4)结果:出现红色为阳性反应。若加入试剂后无颜色反应,可能是:①硝酸盐没有被还原,试验阴性;②硝酸盐被还原为氨和氮等其他物质而导致假阴性结果,这时应在试管内加入少许锌粉,如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色,表明试验为假阴性。

  若要观察是否有氮气产生,可于培养基管内加1只小导管,有气泡产生,则表示有氮气生成。

  (5)应用:本试验广泛用于细菌鉴定。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐;铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌属均可产生氮气;有些厌氧菌如韦荣菌等试验也为阳性。

脂酶试验

  (1)原理:有些细菌产生脂酶,可分解脂肪成游离的脂肪酸。在培养基中加入维多利亚蓝可与脂肪结合成为无色化合物,如果脂肪被分解,则维多利亚蓝被释放出来,呈现深蓝色。

  (2)培养基:含维多利亚蓝的脂酶培养基。

  (3)方法:将待检菌接种于含维多利亚蓝的脂酶培养基中,置37℃孵育24h,观察结果。

  (4)结果:培养基变为深蓝色者为阳性,阴性为无色或粉红色。

  (5)应用:主要用于厌氧菌鉴定。在类杆菌中的中间类杆菌产生脂酶,其它类杆菌阴性;在芽孢梭菌属中产芽胞梭菌、肉毒梭菌和诺维梭菌也产生此酶,而其它梭菌为阴性。

 

卵磷脂酶试验

  (1)原理:有的细菌产生卵磷脂酶(α-毒素),经钙离子作用,能迅速分解卵磷脂,形成混浊沉淀状的甘油酯和水溶性磷酸胆碱。

  (2)培养基:1%卵黄琼脂平板。

  (3)方法:取待检菌划线接种或点种在卵黄琼脂平板上,置35℃孵育3~6h,观察结果。

  (4)结果:3h后在菌落周围形成乳白色混浊环,即为卵磷脂酶试验阳性,6h后该混浊圈可扩大到直径5~6mm。

  (5)应用:该试验主要用于厌氧菌的鉴定。产气荚膜梭菌和诺维梭菌为阳性,其他梭菌为阴性。蜡样芽孢杆菌亦为阳性。

 

凝固酶试验

  (1)原理:凝固酶试验是鉴定葡萄球菌致病性的重要试验。致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶,一种是与细胞壁结合的凝聚因子,称结合凝固酶,它直接作用于血浆中纤维蛋白原,使其变为纤维蛋白,发生凝集,包围于细菌外面而凝聚成块,可用玻片法测出;另一种凝固酶是分泌至菌体外,称为游离凝固酶,它能使凝血酶原变成凝血酶类产物,使纤维蛋白原变为纤维蛋白,从而使血浆凝固,可用试管法测出。

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