|
A4.1 方法
将氧化酶试剂配制成0.5～1％水溶液。将溶液滴加于可疑菌落上，观察颜色变化。也可先将试剂滴在一小张滤纸上，然后挑取可疑菌落与之接触；或先将菌落涂在滤纸上，再滴加试剂，观察有无颜色出现。
A4.2 结果
在滴加1％盐酸二甲基对苯二胺溶液后，一般于15～20s内菌落即呈红色，然后逐步变成紫色，最后呈黑色。在混有杂菌的淋球菌分离平皿上，见到形态具有一定特征且氧化酶阳性的菌落，即可能是淋球菌。氧化酶试验，菌体形态和菌落形态是初步鉴定淋球菌的三个重要标准。
A4.3 注意事项。
为保证有良好的反应，使用的氧化酶试剂不应是过分陈旧的，如试剂已呈灰色或黑色则不应再使用。试剂配好后应放在棕色玻璃瓶中避光保存并尽快用完。氧化酶试剂遇铁也会出现红色，造成假阳性结果，所以操作用的接种环不可用旧铁丝制成。需传代的菌株应在菌落变黑之前挑取，一旦菌落变黑，多数菌已死亡。
A5 糖发酵试验
淋球菌具有分解某些糖类如葡萄糖的能力，使培养基中的指示剂的颜色发生改变。此外，淋球菌不能利用某些糖如麦芽糖，因而该糖发酵培养基颜色不变。
A5.1 糖发酵试剂的配制
A5.1.1 配制20％糖溶液，用过滤灭菌。
A5.1.2 配制缓冲平衡盐指示溶液（BSS）。
每1L中含磷酸氢二钾（K2HPO4）0.4g、磷酸二氢钾（KH2PO4）0.1g、氯化钾（KCl）8.0g、酚红0.6g、pH7.1～7.2.过滤灭菌，贮于4℃备用。
A5.2 方法
A5.2.1 取5支小试管（70mm×10mm）。在1～4管中分别加入20％的灭菌葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖溶液0.05mL，第5管不加糖作对照。
A5.2.2 每管加入0.1mLBSS液。
A5.2.3 每管加入0.05mL菌悬液（淋球菌需用非选择性的巧克力琼脂培养，培养时间为20～24h，超过24h以上的较陈旧培养物可产生假阴性。用直径为3mm的白金耳挑取2满环菌混悬于0.4mLBSS中制成浓厚菌悬液）。
A5.2.4 充分混匀后置37℃水浴中孵育4h观看结果。
A5.3 结果
淋球菌能发酵葡萄糖，产酸，但不发酵麦芽糖、蔗糖和乳糖。因此，只有葡萄糖管的pH下降，颜色由红变黄，其他糖管颜色不变，保持红色。糖发酵试验用于淋球菌的鉴定。
A5.4 注意事项
用于发酵试验的糖类纯度要高。接种发酵管的菌要纯，如若混有杂菌，就会影响结果。由于淋球菌在普通营养琼脂中生长得不好，所以作淋球菌糖发酵的培养基中应加有动物蛋白如血清等。在使用胱氨酸胰酶琼脂（CTA）作糖发酵试验时，可用接种针将菌种入培养管的上三分之一。如将琼脂量由1％增加到1.5％，糖含量由1％增加到2％，则糖发酵试验的时间可缩短到4h.如将糖发酵管放到37℃水浴中，则看结果的时间可更短。
A6 荧光抗体染色法
抗淋球菌抗体标记荧光素后，与淋球菌结合时，可在荧光显微镜下见到发特异荧光淋球菌。
|