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新生隐球菌的检验方法及注意事项

时间:2013-10-19 19:56来源:幸福检验网 收集整理 点击:
新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)是隐球菌病的病原体。该菌在自然界中以腐物寄生性广泛存在,当人体抵抗力低下时,可乘机侵入人体而致病。隐球菌病可以发生在新生婴儿至70岁以上各年龄组人群。本菌可以侵犯皮肤、黏膜、淋巴结、骨、中枢神经和内脏各器官,从而引起不同的临床类型,但随病情发展,最终侵犯中枢神经系统。隐球菌属于不完全纲假酵母目隐球菌属,为无菌丝的单酵母样细胞。本属共有17个种和18个变种,其中新生隐球菌是唯一的致病菌。
 
【分离方法】
 
标本为病人的脑脊液、痰、脓液、尿、活组织及尸体解剖材料。如检查脑脊液,离心取沉淀物检查。
 
1. 培养
 
⑴  检材接种于血液琼脂与葡萄糖牛肉浸汁琼脂平板, 37℃培养,以检查本菌及可能的其它致病菌。
 
⑵  接种于沙保葡萄糖琼脂2支,分别在37℃和室温培养,依据标本的情况,在培养基中加入青、链霉素以抑制细菌生长。
 
⑶  接种于溴甲酚绿(BCG)琼脂培养基。
 
2. 动物实验: 将病人的传染性检材经青、链霉素处理后,制成悬液,注射于小白鼠腹腔内;或取分离到的纯培养物制成盐水悬液,注射于小白鼠的脑腔或腹腔内。3周~4周后取腹部胶质样物质或脑组织镜检,并可从病灶材料分离出真菌。或观察小鼠在2周~8周之内有无死亡。
 
【鉴定方法】
 
1.直接检查
 
⑴ 取检查材料制成盖玻片标本,在显微镜下以弱光观察检查。
 
⑵ 取检查材料放在一滴稀释的印度墨汁内,覆以盖玻片检查。
 
⑶ 冰冻切片应在湿时固定,以未稀释的姬姆萨染色液染色,在标本潮湿时覆以盖玻片检查。
 
在感染的组织、脑脊液、痰、脓液或胶质样渗出液中,本菌为卵圆形至球形、单芽、厚壁、酵母样的病原体,直径5~20μm,四周有宽厚的荚膜。在印度墨汁中,荚膜更为清晰(见图29-1B)。
 
2.培养检查
 
⑴ 接种在沙保葡萄糖琼脂室温培养。本菌生长缓慢,少数菌株至少要培养2周~3周才能形成菌落,开始时为白色,透明发亮,表面光滑凸起,为酵母型菌落,日久菌落变为湿润、粘滑,呈乳酪色至淡褐色,菌落液化,变换角度放置时可缓慢流动。镜检可见有许多芽生细胞,有时也可见到芽管,外围以荚膜。
 
⑵ 在沙保葡萄糖琼脂平板上37℃培养,菌落为湿润、粘液样,呈乳酪色至淡褐色,镜检呈有荚膜的圆形、厚壁、出芽真菌。能在37℃中生长的特性为本菌与其它非病原性隐球菌相区别的特征。
 
⑶ 在溴甲酚绿(BCG)琼脂培养基上,菌落呈蓝色、湿润菌落。而白假丝酵母菌呈白色、淡黄或淡绿菌落。
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