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2.3胆红素氧化酶 lorene等人[7]利用胆红素氧化酶在肌酐测定前预处理血清样品取得了良好效果。其中胆红素氧化酶1000U/L。室温孵育15min。国内陈伟英等人[8]利用胆红素氧化酶在 cobas fARA-Ⅱ型全自动生化分析仪上也取得了类似的效果，将样品8μ l与胆红素氧化酶（200U/ml）8μ l混合，以胆红素氧化酶氧化样品中的胆红素，再加入若味酸试剂80μ l作为起动试剂，进行肌酐测定，其中保温时间90s，反应时间100s。但由于胆红素氧化酶不易获得且成本较昂贵，因此该法在国内未得到普及。 3采用酶法测定肌酐 piero fossati等[9]和张厚亮等[10]利用该法测定血清肌酐，其中试剂1： n-哌嗪-N′-2-乙烷磺酸（ hEPES）-NaOH缓冲液、肌酸脒基水解酶（ cRTase）、尿素酶、谷氨酸脱氢酶（ gLD）、异柠檬酸脱氢酶（ iCD）、α-酮戊二酸。试剂2： hEPES-NaOH缓冲液、 cRNase、反式 n， n， n’， n’-四乙酸-1，2-二氨基环乙烷（ cYDTA）。其反应原理略。 酶法测定肌酐具有操作简便、特异性好、灵敏度高、不受胆红素及多种药物影响、适用于全自动或半自动生化分析仪，不仅能测定血清，而且也可以测定尿液，是目前认为测定肌酐最好的方法，但是其价格相当昂贵，一般至少是碱性苦味酸法的10倍以上，就国内医疗水平，难以普及。 4采用 rate-Blank或 rate-B法测定肌酐 rate-Blank法是利用全自动或半自动生化分析仪中的特殊功能（样品速率空白）来达到克服胆红素干扰的目的。所谓样品速率空白是指将样品与试剂1（氢氧化钠）混合后作为样品空白测得的反应速率，也就是样品中胆红素被氢氧化钠氧化吸光度下降的反应速率，仪器经过自动扣除这种反应速率，将胆红素的负干扰值自动补偿入肌酐与碱性苦味酸的反应中，从而达到了消除干扰的目的。 hoffman rJ、 gerhard g及 alecey v Moshkin等人[11~13]利用 rate-Blank法在 hitachi737、736、 cobas mIRA上取得了良好效果。 n.O’Leary等人[1]将高铁氰化钾法与 rate-Blank法相比较发现两法有很好的一致性。 rate-B法（ twin test）是利用同一反应杯在一个反应周期内进行两个试验测定的功能。如果这两个试验均为速率法时，第一个反应的速率可以自动补偿入第二个反应的速率中去。我们把血清肌酐测定过程分解为两个试验，第一个试验测定胆红素在碱性环境下被氧化引起吸光度减少的速率，第二个试验测定加苦味酸后，肌酐与苦味酸反应所引起吸光度增高以及胆红素被氧化所引起的吸光度减少的总的速率。即前者测定胆红素的干扰，通过仪器微机自动处理，后者在结果计算中自动清除这种干扰，从而利用 rATE-B法达到清除胆红素对肌酐测定干扰的目的。 osselaer、 lievens及石凌波、林龙顺等人[14，15]利用该法在 hitachi717、704、747、7150分析仪上取得良好效果。 rate-Blank或 rate-B法从方法学角度克服了黄疸对肌酐测定的干扰，试剂中不加任何附属成分，操作简便，与酶法结果一致，但此法在应用过程中受到了仪器的局限性。 5小结 近年来，国内外关于胆红素对肌酐测定的负干扰已有许多报道，总的来说，以上的方法各有千秋。预处理法由于添加了其它成分，操作不可避免地显得冗长、繁琐，另一方面因为附加成分的介入，破坏了原有反应体系，可能又会引起新的干扰。但是对于缺乏 tate-Blank或 rate-B法的生化分析仪，预处理法不失是一种很好的消除干扰的方法。而酶法测定肌酐由于价格的关系，目前只被国内少数医院接受，难以普及。我们认为各单位可以根据自己的实际情况来选择测定肌酐的方法。 |