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【摘要】 目的: 探讨自身免疫性溶血性贫血（AIHA）患者的血清学特性, 选择其血型鉴定与交叉配血试验的最适方法。方法: 采用抗人球蛋白试验、 微柱凝胶法（MGT）及手工凝聚胺试验（MPT）, 对患者血液标本进行血型鉴定、 交叉配血试验、 抗体筛查及其特异性鉴定。结果: 在75例疑似AIHA患者中, 发现直接抗人球蛋白试验（DAT）及抗体筛查阳性、 血型正反定型不相符及交叉配血试验不合54例; 经患者自身红细胞吸收后的血清, 在上述试验中不再出现凝集反应者50例, 仍发生凝集反应者4例, 经抗体特异性鉴定为抗C1例、 抗E2例、 抗e1例。结论: AIHA患者多数为抗人球蛋白试验阳性、 造成血型鉴定及交叉配血困难, 少数存在同种抗体并多具有Rh血型抗体特异性。 【关键词】 血型血清学 抗体特异性鉴定 自身免疫性溶血性贫血
自身免疫性溶血性贫血（autoimune hemolytic anemi, AIHA）为自身抗体引起红细胞破坏的一种溶血性贫血。AIHA患者在多次输血免疫刺激后, 可产生同种免疫性抗体, 此类抗体由于患者体内同时存在的自身抗体的掩盖作用而不易被发现。研究AIHA患者自身抗体的类型及其血型同种抗体的特异性, 对确保输血安全有重要的临床意义。我们采用抗人球蛋白试验和吸收放散试验, 对54例AIHA患者自身抗体的类型及同种抗体的特异性进行了鉴定, 选择不含相应抗原及交叉配血试验相合的血液进行输注, 避免了溶血性输血反应的发生。
1 材料和方法
1.1 材料 抗A、 抗B、 抗D、 抗C、 抗c、 抗E、 抗e、 广谱抗人球蛋白血清、 抗人IgG血清、 抗人C3血清、 抗体筛选细胞（Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ号）及抗体特异性鉴定谱细胞（1～10号）均购自上海市血液中心; 凝聚胺试剂盒购自台湾贝索公司; 微柱凝胶卡及其配套设备购自瑞士达亚美公司; 磷酸氯奎、 乙醚（分析纯）系西安化学试剂厂生产; ABO血型反定型试剂红细胞系3名献血员的血液洗涤后混合而成, 由第四军医大学唐都医院输血科制备。在第四军医大学唐都医院就诊的AIHA患者54例(男20例, 女34例, 年龄10～58岁), 均经抗人球蛋白试验及结合临床表现确诊。
1.2 方法
1.2.1 抗人球蛋白试验 抽取患者静脉血6 mL（ACD保存液抗凝）, 2 000 r/min离心10 min, 分离血清与红细胞, 红细胞用生理盐水洗涤3次, 配成30 mL/L的红细胞悬液备用。（1）直接抗人球蛋白试验（Direct antiglobulin test, DAT）: 取30 mL/L的红细胞悬液1滴加入试管中, 再加入抗人球蛋白血清1滴, 摇匀3 000 r/min离心15 s观察结果, 若为阳性, 再用抗IgG和抗C3抗体进行分型; （2）间接抗人球蛋白试验（Indirect antiglobulin test, IAT）: 取患者血清（或血浆）2滴加入试管中, 再加入30 mL/L O型RhD阳性红细胞悬液1滴, 摇匀放37℃水浴30 min, 用生理盐水洗涤3次, 加入抗人球蛋白血清1滴, 3 000 r/min离心15 s观察结果, 阴、 阳性对照参照文献［1］。
1.2.2 同种抗体检测 （1）氯奎放散试验: 将AIHA患者DAT为阳性的红细胞, 用生理盐水洗涤3次, 取压积红细胞0.2 mL, 加入200 mL/L氯奎生理盐水溶液0.8 mL, 在37℃水浴震摇5 min, 再用生理盐水洗涤3次, 取1滴配成50 mL/L 的悬液作DAT, 乙醚放散试验参照文献［2］。（2）自身温抗体吸收试验: 将IAT阳性患者的红细胞用37℃生理盐水洗涤3次, 取1 mL压积红细胞, 加10 mL/L菠萝酶1 mL, 混匀1 000 r/min离心洗涤3次, 将压积红细胞分成2等份, 1份压积红细胞加2 mL患者血清, 混合放37℃水浴30 min, 1 000 r/min 离心2 min, 将血清移到第2份压积红细胞中, 混匀放37℃水浴30 min, 1 000 r/min离心2 min, 吸出自身红细胞吸收后的血清, 用IAT进行同种抗体的检测与特异性鉴定。
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