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2.2.2 405nm波长摩尔吸光系数的校准：最常用的色素原为对硝基苯酚，在波长405nm、光径1cm、温度37℃时对硝基苯酚的摩尔吸光系数为18700。可用ALP测定试剂的缓冲液作为测定试剂，对硝激苯酚标准液作为血清标本，实际测定405nm的吸光度值，根据对硝基苯酚的浓度可计算ε值。如果ε值偏差过大，则需找维修部检查。 3 关于测定温度 影响酶活性测定精确性的一个重要因素是测定温度，也就是说在不同温度时所测得的酶活性是不一样的，测定温度的选择长期未统一，我国已将酶活性测定温度统一为37℃，所用温度的误差不能大于0.1℃。IFCC推荐法的测定温度也由过去的30℃最近改为37℃。因此酶活性的测定温度统一采用37℃。 4 酶活性测定的校准 动力法测定酶活性，各试剂生产厂商都提供了相应的计算因子，这是根据测定程序中样品用量和反应体积比例，以理论摩尔吸光系数计算出来的，称之为理论K值。由于在实测ε值时使用了分析仪的加样系统，加样误差已包含在K值中。用校准K值作为分析参数测定酶，可使不同仪器间测定结果具有可比性，提高酶活性测定结果的准确性。 5 用酶校正物进行酶活性的校准 使用公认的酶校正物进行酶活性测定结果的校准，是国际上最近提出的酶测定标准化新途径。 5.1 使用酶校正物的优点 除具有实测ε值换算出的校准K值所具有的一切优点外，还可促进方法间的一致性和增加常规酶方法的可靠性，可使不同实验室之间的测定结果相对统一。 5.2 酶校正物的使用方法 使用公认的酶校正物按说明书使用，作为待测样本进行7~10次重复测定，取其均值作为校准前测定结果C1，酶校正物的标定值为C，通过以下计算公式，可得出校准K值。 K2= C1:校准前酶校正物的测定结果；C:酶校正物的标定值；K1：理论计算因子；K2：校准后K值。 用校准后K值作为分析参数进行酶活性的测定。 5.3 酶校正物的选择 由于一级校正物价格昂贵，常规工作一般选用用于常规实验室的工作校准品，目前临床常规实验室应用较多的是德国宝灵曼公司的校准品（c.f.a.s）. 5.4 生化分析仪在长期使用过程中，滤光片与加样系统的精度都可能发生变化以及光学系统的灯泡老化、光电转换元件的灵敏度变化等，都会导致测定结果的偏差，所以最好每半年进行一次酶活性的校准。 但日常工作中，遇到下列情况发生时，必须进行校准：⑴改变试剂盒的厂家，或者更换了批号。⑵仪器进行一次大的预防性维护或者更换可重要部件，这些都可能影响检测性能。⑶质控反映出异常的趋势或偏移，或者超出实验室规定的接受限，采取一般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时。 6 酶活性测定的质控 由于酶的影响因素较多，因此，开展酶活性测定的质量控制较困难，但显得更为重要。选择质控血清时以进口质控血清为最佳，其优点是稳定可靠，但价格昂贵。目前上海生物制品研究所生产的19种临床化学项目的质控血清包括了常用的酶类，我们认为稳定性尚可，价格又便宜，适合我国临床实验室特别是中、小型实验室使用。 7 优秀的实验室人才 除临床检验“四要素”——仪器、试剂、方法学和人外，还应不断加强酶学基础理论的学习，理解各分析参数的确切意义，根据大量的实践科学地设置分析参数，努力提高酶学测定的水平。 |