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系统性风湿病的临床免疫学试验进展

时间:2010-03-16 14:55来源:本站收集 点击:

    自身抗体(autoantibodies)是指直接抗细胞内、细胞表面和细胞外成份的抗体。
    (一)细胞内抗原包括核成份和细胞浆成份,常用于免疫风湿病学临床试验诊断的相应抗体有①抗核抗体(antibodies to nuclear antigens, ANAs);②抗细胞浆抗体(antibodies to complasmic antigen, ANCA;如抗中性粒细胞浆抗体(antibodies to neutrophil complasmic antigen, ANCA和抗血管内皮细胞抗体(antibodies to endocelial cell, AECA等)。③细胞表面抗原有人类白细胞相容性抗原(human leukocyte antigen, HLA)及其亚型等。在病理情况下,有些组织细胞也可在细胞膜裸露出各种不同的抗原,并产生相应的自身抗体。抗细胞外成份抗体主要有抗胶原因子和狼疮抗凝物。
    目前临床应用检测自身抗体的主要免疫学试验技术种类有:间接免疫荧光法(indirect immune fluorescence, IIF)、直接免疫荧光法(IF)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶免疫细胞化学、乳胶颗粒凝集、免疫扩散、免疫电泳、放射免疫检验和免疫印迹技术等。其中,IIF法和ELISA法被广泛用于临床检测直接抗细胞成份和可溶性细胞成份抗体的检测。有时为了弥补试验技术或试剂中可能存在的缺陷以及试验条件的影响,提高试验结果的特异性和敏感性,也用一种方法检测多种自身抗体,或一种自身抗体用多种试验方法检测。
    1.ANA ANA,故名思意即抗细胞核成份的抗体,是所有抗核抗体的总称。到目前为止,至少发现有30种抗核成份的抗体,这些核抗原主要分布在细胞刻内,但也有分布在核周的胞浆内。ANA最早用于诊断系统性红斑狼疮,目前作为系统性红斑狼疮和其他系统性风湿病的筛选试验诊断,具有很高的敏感性,但缺乏特异性(表-1)。   
    检测ANA的方法有间接免疫荧光和ELISA两种方法,在实验室操作和临床意义方面两者有差异。
    (1)间接免疫荧光 常用的底物为有核组织细胞,如鼠肝或鼠肾组织细胞;也用肿瘤细胞株,如子宫颈癌细胞(Hela cell)或喉癌细胞(Hep-2 cell)。由于癌细胞的核更大,增殖活跃,细胞的分裂期明显,故更易观察和分析结果。依照细胞核染色的类型分为:斑点型(specle, S型)、匀质型(difusion, D型)、周边型(peripheral, P型)和核仁型(nucleolei, N型)4型。也有人将其中的斑点型又分为粗斑点型)和细斑点型(即着丝点型,antibody to centromere antigen, ACA),共分为5型。各核型的ANA在不同的系统性风湿病中有各自相对的特异性。少数老年人可有低滴度的ANA阳性。

表-1 风湿病中ANA及其临床意义

疾病
ANA阳性率(%)
核型
滴度
系统性红斑狼疮
95~99
P,D,S,N
50%>1:640
干燥综合征
75
D,S
大多较低
类风湿关节炎
15~35
D
10%>1:640
系统性硬化症
0~90
S,N,D
大多较高
混合结缔组织病
6
S,D
大多较高
药物诱导狼疮
100
D,S
有时较高
正常人群
<5
D
极少>1:80


    应当指出的是:在应用间接免疫荧光法检测抗核抗体时可能出现敏感性过高(即假阳性)或敏感性过低(即假阴性),这在实验过程中是可能遇到的。敏感性过高(即假阳性)的原因主要发生在实验过程中的技术问题,可能对二抗(荧光抗体)的漂洗不彻底所致,严格按程序操作或加用伊文斯兰染色覆盖其非特异荧光即会避免此类问题的发生。发生敏感性过低(即假阴性)的原因较多:①由于经典的间接免疫荧光法检测抗核抗体是用单种细胞针对多种抗体的检测,不同的组织细胞核内所含的针对这些抗体反应的抗原物质的含量或抗原性有差异:如小牛胸腺和兔胸腺细胞核内所含的抗原量明显富于其他组织细胞,组蛋白和硬皮病-70(Scl-70)抗原分别在肾脏和脾脏细胞核中含量高。当一些组织细胞所含的某种核抗原的量较少或抗原的抗原性较弱时,与抗体发生的免疫反应不足以用IIF法检测到,由此造成实验结果假阴性;②不同病人和不同病期或病种的血清中所存在的抗体种类和抗体的量有明显的差异,也同样会影响实验结果。
    (2)ELISA法 此实验方法检测ANA在试验原理上反应敏捷,操作简便。所用试剂是TRINITY公司新近研究推出的一种经过特殊处理的反应底物作为抗原包被的96孔反应板。此抗原的包被分两步:①先将经过培养并稀释好的Hep-2细胞悬液中的细胞包被到反应板孔内;②再将已经提纯好的,针对通常用于临床检测的多种ANA相应的多组份核抗原包被到同一反应板孔内。如此的包被抗原既克服了单种细胞作为反应底物的缺陷,又同时提高了实验的敏感性。
    (3)依照抗原的生物化学特性将ANA分为4大类:抗DNA类、抗组蛋白(histone, H)类、抗非组蛋白类即抗可提取性核抗原(extractable nuclear antigen, ENA)类和抗核仁类抗体。共有30余种抗体,其中临床常用10余种,构成ANA谱,其在系统性风湿病中的临床意义见表-2。

表-2 ANA谱及其临床意义※

 
系统性红斑狼疮
混合性结缔组织病
类风湿关节炎
系统性硬化症
多发性肌炎
干燥综合征
抗核抗体
>95
99
20~50
30
20~30
20~60

抗DNA类抗体
抗双链DNA抗体

50~80
少见
3~5
少见
少见
0~29
抗DNP抗体
70
8
少见
少见
少见
5~39
抗H类抗体
抗组蛋白抗体
25~60
20
0~27
0~10
0~30
抗ENA类抗体
抗Sm抗体
25~40
少见
少见
少见
少见
抗RNP抗体
26~45
100
10
10~22
0~20
0~14
抗SSA/Ro抗体
30~40
少见
5~20
0~10
少见
60~75
抗SSB/La抗体
0~15
0~20
0%~5
0~5
少见
50~60
抗Scl-70抗体
-
-
-
30
-
-
抗着丝点抗体
-
-
-
40~90
(局限型者)
-
-
抗PM-1抗体
-
-
-
30~50
-
-
抗Jo-1抗体
-
-
-
-
20~50
-
抗N类抗体
抗核仁抗体
6
-
15
39
-
9

    ※ 表内数字均为百分数

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