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1.4 试剂
PCR所需引物由上海生工技术有限公司合成， TaKaRa DR001A Tag酶为上海(大连)宝生公司产品;Mark为TaKaRa公司产品; GNI+鉴定卡为上海祥和科技有限公司产品。
1.5 仪器
VITEK32型全自动微生物鉴定药敏测试仪，高速低温离心机，梯度PCR扩增仪，Gene Genius凝胶成像仪，恒温水浴箱等。
2 结果
2.1 药敏结果分析
34株多重耐药铜绿假单胞菌体外对15种抗生素的药敏结果见表2。从表2中可见，多重耐药铜绿假单胞菌对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、阿米卡星的敏感率较高，分别为55.88%、55.88%、55.88%、50%、47.06%。
2.2 β内酰胺酶基因及Ⅰ类整合子检测结果
检出率最高的是qacE△1-sul1，占91.18%，与其体外复方新诺明药敏试验结果基本符合。其他基因检出率由高到低为oprD2缺失(47.06%)，TEM(44.12%)，OXA-10(38.24%)，VIM(11.76%)，SPM(8.82%)，VEB(5.88%)，未检出IMP、GIM、PER、GES、CARB、DHA、CTX-M、intⅠ1。同一株细菌可同时携带2种或2种以上的耐药基因，有多种基因型组合方式，有TEM+SHV+OXA-10+qacE△1-sul1; TEM+SHV+OXA-10+VEB等多种基因组合。表1 耐药基因引物序列表2 34株铜绿假单胞菌对15种抗生素的药敏结果
3 讨论
OprD2被认为是亚胺培南扩散的通道，其缺失可导致细菌对亚胺培南的耐药，使得临床亚胺培南治疗失败。34株多重耐药铜绿假单胞菌共检出OprD2缺失菌占47.06%，OprD2缺失菌株大多伴有其他耐药基因的存在，单纯OprD2缺失只有一株。可见本院铜绿假单胞菌对亚胺培南产生耐药的机制是复杂的。
整合子水平式传播是介导革兰阴性菌特别是肠道菌和假单胞菌属细菌多重耐药的重要原因。现已确认起最主要作用的为Ⅰ类整合子[6,7]。 intⅠ1与qacE△1-sul1基因为Ⅰ类整合子的遗传标记，单独或同时阳性均表明细菌存在Ⅰ类整合子。I类整合子可同时携带多种耐药基因，造成大面积的细菌同时对某类(种)抗生素耐药。Ⅰ类整合子最常见，其5′保守端有编码整合酶的Ⅰ类整合酶基因intⅠ1 及启动子，大多数3′保守端有3个ORF：季铵盐化合物及溴乙锭的耐药基因(qacE△1)、磺胺耐药基因(sul1)、功能不明的开放阅读框架ORF5。本研究检测34株铜绿假单胞菌qacE△1-sul1，发现有31株(91.2%)为阳性，表明本组菌株Ⅰ类整合子携带率很高，与文献报道基本一致[8]。qacE△1同时也是消毒剂耐药基因，其产物可使多种化合物排出胞外，赋予细菌对季铵类、双胍类消毒剂耐药。sul1为二氢蝶酸合成酶的编码基因，阳性提示细菌对磺胺类药物耐受。本组34株PA均对复方新诺明全部耐药，表明研究菌株的基因型与表型符合。
近来不断发现水解卡巴配能的金属酶IPM、VIM、SPM、SIM和GIM，有些还引起了医院的爆发流行[9,10]。VIM已在我国许多地区发现，以VIM-2型为主，SPM型在我国尚未有此基因型的报道。本研究检出VIM(11.76%)，SPM(8.82%)，未检出IPM和GIM。
TEM、SHV、OXA、CTX-M、VEB、GES等是常见的超广谱β内酰胺酶，本研究对34株铜绿假单胞菌进行上述基因的检测，结果显示本地区以TEM、OXA-10流行为主。
【参考文献】
1 Doi Y， Ghilardi A C. R， Adams J，et al. High prevalence of metallo-β-lactamase and 16S rRNA methylase coproduction among imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa isolates in Brazil[J]. Antimicrob Agents Chemother,2007,51(9)： 3388-3390.
2 Gutie
作者：万 瑛1，阴 晴1，成 静2，段秀杰1，高 雁1，陆建成1 作者单位：(1.江苏大学附属医院检验科，江苏 镇江 212001;2.江苏大学基础医学与技术学院，江苏 镇江 212013)
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