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高 纯，顾国浩，喻霞云
1 操作与维护 1．1 变色龙只有4个孵育位，_一次最多只能放4块酶标板我们采用“拼板”的形式进行操作：将HBsAg与HBsAb、HBeAg与HBeAb各半块分别拼成一块板，HBeAb半块板。这样，每批可同时处理5个项目。 1．2 应急反应程序的编制 当仪器故障或其他原因致使试验不能完成时，可复制原程序，删除已完成的步骤后再进行 。 1．3 日常维护 开机前查看注射器有无漏水或盐迹，加样针洗槽有无赃物堵塞。开机后，执行PRIME程序，观察加样针及洗板头是否畅通。每批试验完成后，尽快做一次冲洗(RINsE)，关机前，做一次“手工清洗加样针”(MANUAL PROBE wASHING)，用纱布蘸7O 酒精擦拭针头和白色绝缘体。每月执行一次液路消毒(DEc()NTAMINAT10N)操作以保证液路畅通。 2 常见故障及处理 2．1 洗板是EI ISA 的关键步骤 洗板可以分离游离的、与固相抗原或抗体结合的物质，并且可减少样品中与反应无关的蛋白质和其他杂质的非特异性吸附。洗板如不彻底，将使本底增高，结果呈假阳性。变色龙运行正常时，洗板后微孔残留的液体量很少，可以满足ELISA实验的要求。有关洗板的常见故障如下。 2．1．1 溶血、脂血及红细胞的干扰有学者认为溶血、脂血会影响ELISA 反应，但现在一般认为溶血、脂血样本对ELISA检测结果影响不大[_2]。但笔者发现将血液3 000rpm／5 min离心后分离的血清直接上机测试，微孔会出现非特异性显色；而将分离的血清5 000 rpm／5 min再次离心使红细胞完全沉淀后上机，可避免上述干扰。其原因可能是：37C孵育后，完整的红细胞较血红蛋白更牢固地粘附于微孔内壁，不易从微孔中洗脱下来。血红蛋白中的铁卟啉是过氧化物酶的类似物，在以HRP作为酶标记物的ELISA测定中，红细胞中的血红蛋白可能会增加非特异性显色。 2．1．2 洗板机堵孔 堵孔时，常见整条微孔板均显色 此时，应将洗板头取下，用针挑出或用注射器注水压出堵塞物。 堵孔常见的原因如下。 2．1．2．1 纤维蛋白 标本中的纤维蛋白没有完全析出，加样后形成纤维蛋白丝，堵塞洗板头。 2．1．2．2 洗涤液中的漂浮物 洗涤液放置一段时间后会形成沉淀，进人液路系统后，可使洗板机针孔堵塞。因此，应定期清洗洗涤瓶。 2．1．3 微孔板潮湿微孔板中注满的洗涤液在洗板架移动时，往往会从微孑L中流出，可能会对仪器读板的结果及电路有一定的影响。采用WASH 程序中的边加边吸的方式，可避免微孔板潮湿。 |