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SOP标准文件之ABO血型鉴定(生理盐水法)

时间:2010-11-27 22:22来源:幸福检验 xf366.com 点击:

 1. 原理

根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原,将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原,B型红细胞膜上含有B抗原,AB型红细胞膜上含有A、B抗原,抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验,通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型,是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时,与抗A试剂发生凝集者即为A型,与抗B分型试剂发生凝集者即为B型,与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型,与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。所谓反定型,是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。

2. 标本采集

2.1 标本种类:新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。

2.2 标本要求:

2.2.1 抗凝剂:如用抗凝血,多主张用EDTA K2(㎎/dL)抗凝。

2.2.2 用手指末梢血作血型检测时,最少样品量为100ul,如手指有冻疮,则主张采耳垂血。

3. 标本储存:2小时内完成实验,室温放置下不超过8小时,4℃-8℃保存不超过48小时。

4. 标本运输:室温运输

5. 标本拒收标准:细菌污染、溶血标本不能作测定

6. 试剂

6.1 试剂名称:ABO血型检测试剂

6.2 试剂生产厂家:南京华欣药业生物工程有限公司

6.3 试剂组成

试剂1:抗A分型试剂(蓝色),效价1:128,2℃-8℃避光保存,室温放置不宜过久。

试剂2:抗B分型试剂(黄色),效价1:128,2℃-8℃避光保存,室温放置不宜过久。

试剂3:5%A、B及O型红细胞盐水悬液,自制。配制方法:分别采取已知A、 B、O三种血型的红细胞,经盐水洗涤3次,以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。

红细胞悬液的配制

悬液浓度(%)

压积红细胞(滴)

盐水(滴)

2

5

10

20

1

1

1

1

2ml(40)

0.8ml(16)

0.4ml(8)

0.2ml(4)

为了防止红细胞悬液敏感性不一致,可随机采取3个或以上的健康成人血液,按A、B、O型分别混合后,按上法制备。

7. 操作步骤

7.1 玻片法

7.1.1 取清洁玻片1张(或白瓷板1块),用肥皂水刷洗后晾干,用蜡笔划出小格,并注明A、B字样。将抗A试剂、抗B试剂各一滴分别滴于玻片(或瓷盘)上A、B处。分别取等体积待检血样(5%-10%红细胞悬液或全血)于抗A试剂和抗B试剂。

7.1.2 另取洁净玻片1张(或白瓷板1块),用蜡笔划成方格,标明A细胞、B细胞和O细胞,用滴管各加受检者血清1滴,再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。

7.1.3 用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀,同时不停的摇动玻片(或瓷盘)并观察血型凝集(或溶血)反应。如以玻片做试验时,也可用低倍镜观察结果。

7.2 试管法

7.2.1 取洁净小试管(内径10mm×60mm)2支,分别标上A、B字样,用滴管分别向A管滴加抗A分型试剂1滴。向B管滴加抗B分型试剂1滴。向A、B管各滴加待检血样的5%红细胞悬液各1滴,混合。

7.2.2 另取洁净小试管(内径10mm×60mm)3支,分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部,再分别以滴管加入A、B和O型5%红细胞悬液1滴,混合。

7.2.3 摇匀后以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象。如肉眼不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜检查。

8. 结果判断

8.1 观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度,此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。

8.2 凝集强度判断标准:

4+=红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。

3+=红细胞凝集成数小块,血清尚清晰。

2+=红细胞凝块分散成许多小块,见到游离红细胞。

1+=肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。

±=镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞。

MF=混合凝集外观是指镜下可见少数红细胞凝集,而绝大多数红细胞仍呈分散分布。

-表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布。

8.3 按下表报告受检者红细胞ABO血型

 

ABO血型正反定型结果

分型血清+受检者红细胞

受检者

受检者血清+试剂红细胞

抗-A

抗-B

抗-A+B

血型

A

B

O

AB

A细胞

B细胞

O细胞

             

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